dpo(dual priming oligonucleotide)引物是由chun等[9]于2007年第1次提出,其特点在于它包含2个各自独立的特异性引物区域,5′端序列由18~25个碱基组成并与靶基因序列配对,3′端序列由6~12个碱基组成用来引导pcr反应的特异性延伸,这两段独立的特异性区域利用寡聚次(inosine,i)进行连接,由于比一般碱基的退火温度低,在退火时寡聚次形成类似泡状的结构,从而使5′和3′区域形两个独立功能的双特异性引物结构,而且由于其特殊的结构,引物自身以及引物之间很难形成二级结构且对退火温度不敏感,在一定范围内改变退火温度对检测特异性不产生影响,如图1所示。而且理论上5′和3′任何一个区域超过3个碱基不匹配就不能扩增,运用dpo引物这一特点,已建立了基于dpo引物的snp的检测方法[9]。目前,dpo引物已经被广泛应用于医学病原菌、食源性微生物等[10-11]。本研究拟运用dpo引物高特异性、不受退火温度影响等特征,结合sybr green ⅰ实时荧光pcr技术,建立一种特异性强、灵敏度高的植物乳杆菌检测方法。
植物乳杆菌代谢可以产生有机酸、细菌素、双乙酰等多种天然的抑菌物质,具有维持肠道内菌群平衡,降低胆固醇水平,提高机体免疫,促进营养物质吸收,缓解乳糖不耐症及抑制坏的细胞形成等多种功能[1]。有报道称,益生菌发酵乳制品如牛奶、酸乳和乳酪在体内模型中具有显著的血脂功能[2],而且临床实验证明,植物乳杆菌具有有效地调节血中脂质的作用[3]。现代乳品工业中常用嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌发酵牛乳制备酸奶,而由于植物乳杆菌不仅能增进发酵食品的营养价值,改善口感和风味,同时能产生抗菌物质,延长发酵食品的保存时间,因此在功能性酸乳发酵中得到广泛应用[4]。
植物乳杆菌通过与病原菌对限制性营养素的能力竞争, 来抑制病原菌的生长, 调节肠道微生态的组成, 形成生物学屏障。同时, 通过其代谢所产生的代谢产物乳酸、细菌素、以及双乙酰对其它细菌的作用, 调整菌群之间的关系, 维持和保证菌群优势组合以及这种组合的稳定, 阻止了致病菌的定殖和入侵, 拮抗致病菌和有害微生物的生长和粘附。
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